酵母单一亚单位NADH-泛醌氧化还原酶定点突变对酶活性及泛醌结合部位的影响

杨宇；石丽娟；张璠

关键词：酵母, Ndi1, 泛醌结合部位, 定点突变

摘要：目的：采用定点突变方法探讨突变体对酵母Ndi1的NADH-泛醌氧化还原酶活性及泛醌结合部位的影响。方法定点突变方法将Ndi1的His残基（His193、His252、His301）突变为丙氨酸，转染大肠杆菌后表达蛋白，测定光谱特性，NADH-泛醌氧化还原酶活性和米氏常数Km及大反应速度Vmax。结果各突变体蛋白H193A、H252A、H301A吸收光谱显示均在383nm和448nm处出现两个FAD峰与野生型一致；各突变体酶活性显示，突变体对UQ1的Vmax均明显减小，但仅H301A对UQ1的Km增加约3倍，对UQ亲和力明显减小。各突变体蛋白对NADH的Km未见明显增大，但Vmax均出现明显减小。结论酵母Ndi1中H301点突变可能是参与形成UQ结合位点所需的氨基酸残基之一，该位点突变影响了UQ与酶的结合及电子向UQ的传递。